2023年8月3日发(作者：)
生物碱概述
02级生物科学1班
薛婧
40208132
生物碱(alkaloid)是一类存在于生物界(主要是植物)中，大多具显著生物活性的含氮的碱性化合物。氮通常在环中。分子中含有碳、氢、氧和氮四种元素，极少不含氧原子。
生物碱广泛分布于植物界约100余科的植物中，其中以双子叶植物为多，其次为单子叶植物、裸子植物与蕨类植物。在地衣类和苔藓类植物中，尚未发现生物碱。少数真菌中也有生物碱。蛙类、蟾蜍、某些昆虫、加拿大海狸等动物中也存在生物碱。 生物碱是生药中一类重要的有效成分，目前已分离到10000余种，其中80余种已用于临床，如黄连中的小檗碱(berberine)用于抗菌消炎，麻黄中的麻黄碱(ephedrine)用于平喘，萝芙木中的利血平(reserpine)用于降压，喜树中的喜树碱(camptothecine)与长春花中的长春新碱(vincristine)用于抗肿瘤等。
(一)分类
生物碱品种繁多，根据不同需要有多种不同的分类法，如按生物碱的生物来源(如茄科生物碱……)、生理作用(如降压生物碱……)、性质(如挥发性生物碱……)、生源(如真生物碱、原生物碱、伪生物碱)及其母核的基本结构来分类。后者是最常用的分类方法，可将生物碱分为60类左右，其中主要有以下12类：
(1)有机胺类(Amines)：氮原子位于直链上，如麻黄碱、益母草碱、秋水仙碱等；
(2)吡咯烷类(Pyrrolidine)：如古豆碱、千里光碱、野百合碱、娃儿藤碱等；
(3)吡啶类(Pyridine)：如菸碱、槟榔碱、半边莲碱、苦参碱等；
(4)喹啉类(Quinoline)：如奎宁、喜树碱等；
(5)异喹啉类(Isoquinoline)：如小檗碱、吗啡、粉防已碱、石蒜碱、可待因、青藤碱、锡生藤碱等；
(6)喹唑酮类(Quinnazolidone)：如常山碱等；
(7)吲哚类(Indole)：如利血平、长春碱、麦角新碱、士的宁等；
(8)莨菪烷类(Tropane)：如莨菪碱、东莨菪碱、古柯碱等；
(9)亚胺唑类Imidazole)：如毛果芸香碱等；
(10)嘌呤类(Purine)：如咖啡碱、茶碱、香菇嘌呤、石房蛤毒素等；
(11)甾体类(Steroid)：如茄碱、贝母碱、藜芦碱、澳洲茄碱等； (12)萜类(Terpenes)：如猕猴桃碱、石斛碱、乌头碱、飞燕草碱、黄杨碱等。
(二) 理化性质
1. 性状 大多数生物碱为结晶状固体，少数为液体，如菸碱、毒藜碱、槟榔碱等。液体生物碱通常不含氧原子，或分子中的氧原子多形成酯键。一般生物碱均无色，少数具颜色，如小檗碱(黄色)、血根碱(红色)。味苦。少数生物碱，如麻黄碱与液体生物碱具挥发性，可随水蒸气蒸馏。
2. 旋光性 大多数生物碱含不对称碳原子，所以有旋光性。大多数生物碱具左旋光性。
3. 酸碱性 大多数生物碱具碱性反应，能使红色石蕊试纸变蓝色。碱性的强弱与分子中氮原子存在的状态有密切关系，一般是季胺碱>叔胺碱>仲胺碱。若氮原子呈酰胺状态，则碱性极弱甚至消失，如胡椒碱、秋水仙碱等。有的生物碱分子具有酚羟基或羧基，因而具酸碱两性，如槟榔次碱(arecaidine)和吗啡等。
4.溶解度 游离生物碱极性较小，不溶或难溶于水，能溶于氯仿、乙醚、苯、丙酮、乙醇等有机溶剂，也能溶于稀酸的水溶液而生成盐类。生物碱盐类易溶于水和乙醇，不溶或难溶于有机溶剂。此性质可用于生物碱的提取、分离和纯化。但也有不少例外，如麻黄碱、秋水仙碱均可溶于水，也溶于有机溶剂；小檗碱可溶于水，其盐在冷水中反而不溶；酚性生物碱可溶于氢氧化钠溶液；所有季铵盐生物碱由于能离子化，亲水性强，均能溶于水等。
5. 沉淀反应 大多数生物碱在酸性水溶液中，能与一些特殊的试剂(生物碱沉淀剂)作用，生成沉淀。利用这些沉淀反应，不但可以预试生物碱的存在与否，也可以用于生物碱的精制，或在提取过程中，用于指示提取是否完全。但直接用中药的酸水浸出液作生物碱沉淀反应，常不能得到准确的结果，因为水浸液中某些成分(如蛋白质、鞣质、胺类等)也能和生物碱沉淀剂产生沉淀，因此，必须将水浸液精制后再行试验。通常先选用3种以上不同的生物碱沉淀剂进行试验，若均为负反应，则肯定无生物碱存在；若呈正反应，则必须精制后再试验，第二次再呈正反应，才可确证存在生物碱。
常用的生物碱沉淀剂种类很多，通常是一些重金属盐类或分子量较大的复盐，以及特殊的无机酸或有机酸的溶液，常用的沉淀剂如下：
(1)碘化铋钾试剂(Dragendoff试剂，BiI3·KI)：在酸性溶液中与生物碱反应生成桔红色沉淀[Alk·KI·(BiI3)n，为一种络盐，Alk表示生物碱，下同]。此反应很灵敏。
(2)碘-碘化钾试剂(Wagner试剂，I2·KI)：在酸性溶液中与生物碱反应生成棕红色沉淀(Alk·HI·In)。
(3)碘化汞钾试剂(Mayer试剂，HgI2·KI)：在酸性溶液中与生物碱反应生成白色或黄白色沉淀[AlK·HI·(HgI2)n]。 (4)硅钨酸试剂(Bertrand试剂，SiO2·I2WO3)：在酸性溶液中与生物碱反应生成灰白色沉淀。
(5)磷钼酸试剂(Sonnenschein试剂，H3PO4·I2MoO3)：在中性或酸性溶液中与生物碱反应生成鲜黄色或棕黄色沉淀。此反应很灵敏。
(6)苦味酸试剂(Hager试剂)：在中性溶液中与生物碱生成淡黄色沉淀。
(7)氯化金试剂(HAuCl4试剂)：在酸性溶液中与生物碱反应生成黄色晶形沉淀。由于不同生物碱产生的结晶形状常不同，可用于鉴别。
6. 显色反应 生物碱能与某些试剂(显色剂)生成特殊的颜色，可供生物碱的识别。试验中，应对供试液进行纯化精制，纯度愈高，显色愈明显。显色剂的种类很多，除浓硫酸、浓硝酸、硫酸和重铬酸钾、浓盐酸或氯化铁外，大多数是由浓硫酸中加入少量其他化学试剂组成。常用的显色剂如下：
(1)矾酸铵-浓硫酸溶液(Mandelin试剂)：为1%矾酸铵的浓硫酸溶液。该试剂能与多数生物碱反应，呈现不同的颜色，如与阿托品、东莨宕碱显红色，与马钱子碱显血红色，与士的宁显紫色，与奎宁显淡橙色，与吗啡显棕色，与可待因显蓝色。
(2)钼酸铵(钠)-浓硫酸溶液(Frobde 试剂)：为1%钼酸铵或钼酸钠的浓硫酸溶液。该试剂能与可待因显黄色，与小檗碱显棕绿色，与乌头碱显黄棕色，与阿托品及士的宁不显色。在使用时应注意，该试剂与蛋白质也能显色。
(3)甲醛-浓硫酸试剂(Marquis试剂)：为30%甲醛溶液0.2ml与浓硫酸10ml的混合液。该试剂能与可待因显蓝色，与吗啡显紫红色，与咖啡碱不显色。
(4)浓硫酸：该试剂能与乌头碱显紫色，与小檗碱显绿色，与阿托品不显色。
(5)浓硝酸：该试剂能与小檗碱显棕红色，与秋水仙碱显蓝色，与乌头碱显红棕色，与咖啡碱不显色。
(三)含量测定：
一、非水碱量法
生物碱在水中碱性较弱，不能顺利地进行中和滴定（滴定突跃不明显，难以判断滴定终点）。在酸性非水介质中（如gHAc中），则能显示出较强的碱性，滴定突跃增大，可以顺利地进行中和滴定。
供试品：以消耗标准液8ml计算。溶剂：gHAc，一般用量10~30ml，滴定剂：0.1mol/L
HClO4/无水gHAc溶液，指示剂：结晶紫
适用范围
Kb﹤10-8的有机碱盐。
Kb为10-8到10-10选冰醋酸作溶剂 Kb为10-10到10-12选冰醋酸和醋酐作溶剂
Kb<10-12选醋酐作溶剂
二、提取中和法
1．基本原理
利用生物碱盐类可溶于水,游离生物碱不溶于水而溶于有机溶剂的性质进行提取，然后进行滴定的方法。
2．讨论
(1) 碱化试剂
① 常用的碱化试剂 NaOH、NH3、Na2CO3、NaHCO3、Ca(OH)2、MgO等。
② 对碱化试剂的要求 碱化试剂碱性大于生物碱的碱性，即碱化试剂的pKb＜生物的pKb
③ 选用碱化试剂时应考虑的因素
ⅰ．生物碱的化学性质：易水解或具两性，不能用强碱性碱化试剂。阿托品具有酯结构，与强碱接触时分解；吗啡具有酚羟基，和NaOH形成酚盐溶于水，难以用有机溶剂提取。
ⅱ．脂肪性物质的共存：有脂肪性物质共存时，不能用强碱性的碱化试剂，以免形成乳化而难以用有机溶剂提取。
④ NH3优点：氨水是最常用的碱化试剂。 氨Kb值：1.75×10-5 一般生物碱Kb：10-6~10-9 氨碱性适当，能使大部分生物碱游离，又不能使具酯结构或两性生物碱水解或成盐。
(2) 提取溶剂
提取溶剂要求 ⅰ．不与水相混溶 ⅱ．沸点低，容易挥散除去 ⅲ．对所提取生物碱有极大的溶解度，而对其它共存物质不溶或极少溶解 ⅳ．与碱化试剂或生物碱不起任何化学反应。 常用的提取溶剂：氯仿、乙醚，有时也使用混合溶剂
3．主要条件
最主要条件是水相的pH。 要求：能使有机碱全部以盐的形式存在，酸性染料能够解离成离子，以便它们定量地结合成离子对而转溶于有机相，且又能将剩余的染料完全保留在水相。
四、凯氏定氮法
1、原理
含氮供试品与浓硫酸共热，供试品中所含氮转变成氨，并与硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，用氢氧化钠碱化后，释出氨，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸吸收后，用标准酸液或标准碱液滴定，用空白试验校正。 凯氏定氮法分为3个步骤。
(1)．消解
在凯氏烧瓶中进行。将样品、Con.H2SO4、K2SO4、CuSO4放入凯氏烧瓶中一起加热，有机含N化合物中的N全部转变成NH3并以铵盐的形式固定－(NH4)2SO4、NH4HSO4。
(2)．蒸馏与吸收
用40%的NaOH溶液水蒸气蒸馏
(NH4)2SO4+2NaOHNa2SO4+2NH3+2H2O
NH4HSO4+NaOHNaHSO4+NH3+H2O
(3)．测定
① 直接滴定法
吸收液：用2%硼酸溶液
滴定液：0.005mol/L H2SO4液
每1ml的0.005mol/L H2SO4液0.1401mg的N
指示剂：甲基红-溴甲酚绿混合指示剂
终点颜色：灰紫色
NH3+H3BO3NH3.H3BO3
2NH3.H3BO3+H2SO4(NH4)2SO4+2H3BO3
② 剩余滴定法
用标准盐酸或硫酸作吸收液。
将蒸馏出来的NH3吸收于定过量的标准酸溶液中，过量的酸用标准碱溶液滴定。
五．高效液相色谱法：
1．特点：80~90%反相色谱分离，最常用十八烷基硅烷键合硅胶（ODS）。硅胶表面仅有25~50%硅醇基可与硅烷化试剂作用，在分离极性化合物特别是碱性药物和生物碱时，裸露的硅醇基和碱性药物发生吸附或离子交换作用，而使色谱峰拖尾，保留时间过长，甚至长期保留在色谱柱上。
2．三种主要方法：（1）加扫尾剂法：以十八烷基硅烷（ODS）键合的硅胶为固定相，在流动相中加入扫尾剂，以抑制或掩蔽固定相表面的游离硅醇基的活性。最常用的扫尾剂是三乙胺（TEA）。（2）用硅胶作固定相法：在不改性的普通硅胶柱上，利用碱性成分与硅醇基相互作用，以高浓度极性有机溶剂，碱性水相缓冲液为流动相分离碱性药物。（3）用金刚烷基硅烷化硅胶作固定相法：这种固定相表面被一根根短的烃链（乙基）连着的烃球（金刚烷）将硅胶表面上未反应的硅醇基全部覆盖，使其不能与极性物质作用。
2023年8月3日发(作者：)
生物碱概述
02级生物科学1班
薛婧
40208132
生物碱(alkaloid)是一类存在于生物界(主要是植物)中，大多具显著生物活性的含氮的碱性化合物。氮通常在环中。分子中含有碳、氢、氧和氮四种元素，极少不含氧原子。
生物碱广泛分布于植物界约100余科的植物中，其中以双子叶植物为多，其次为单子叶植物、裸子植物与蕨类植物。在地衣类和苔藓类植物中，尚未发现生物碱。少数真菌中也有生物碱。蛙类、蟾蜍、某些昆虫、加拿大海狸等动物中也存在生物碱。 生物碱是生药中一类重要的有效成分，目前已分离到10000余种，其中80余种已用于临床，如黄连中的小檗碱(berberine)用于抗菌消炎，麻黄中的麻黄碱(ephedrine)用于平喘，萝芙木中的利血平(reserpine)用于降压，喜树中的喜树碱(camptothecine)与长春花中的长春新碱(vincristine)用于抗肿瘤等。
(一)分类
生物碱品种繁多，根据不同需要有多种不同的分类法，如按生物碱的生物来源(如茄科生物碱……)、生理作用(如降压生物碱……)、性质(如挥发性生物碱……)、生源(如真生物碱、原生物碱、伪生物碱)及其母核的基本结构来分类。后者是最常用的分类方法，可将生物碱分为60类左右，其中主要有以下12类：
(1)有机胺类(Amines)：氮原子位于直链上，如麻黄碱、益母草碱、秋水仙碱等；
(2)吡咯烷类(Pyrrolidine)：如古豆碱、千里光碱、野百合碱、娃儿藤碱等；
(3)吡啶类(Pyridine)：如菸碱、槟榔碱、半边莲碱、苦参碱等；
(4)喹啉类(Quinoline)：如奎宁、喜树碱等；
(5)异喹啉类(Isoquinoline)：如小檗碱、吗啡、粉防已碱、石蒜碱、可待因、青藤碱、锡生藤碱等；
(6)喹唑酮类(Quinnazolidone)：如常山碱等；
(7)吲哚类(Indole)：如利血平、长春碱、麦角新碱、士的宁等；
(8)莨菪烷类(Tropane)：如莨菪碱、东莨菪碱、古柯碱等；
(9)亚胺唑类Imidazole)：如毛果芸香碱等；
(10)嘌呤类(Purine)：如咖啡碱、茶碱、香菇嘌呤、石房蛤毒素等；
(11)甾体类(Steroid)：如茄碱、贝母碱、藜芦碱、澳洲茄碱等； (12)萜类(Terpenes)：如猕猴桃碱、石斛碱、乌头碱、飞燕草碱、黄杨碱等。
(二) 理化性质
1. 性状 大多数生物碱为结晶状固体，少数为液体，如菸碱、毒藜碱、槟榔碱等。液体生物碱通常不含氧原子，或分子中的氧原子多形成酯键。一般生物碱均无色，少数具颜色，如小檗碱(黄色)、血根碱(红色)。味苦。少数生物碱，如麻黄碱与液体生物碱具挥发性，可随水蒸气蒸馏。
2. 旋光性 大多数生物碱含不对称碳原子，所以有旋光性。大多数生物碱具左旋光性。
3. 酸碱性 大多数生物碱具碱性反应，能使红色石蕊试纸变蓝色。碱性的强弱与分子中氮原子存在的状态有密切关系，一般是季胺碱>叔胺碱>仲胺碱。若氮原子呈酰胺状态，则碱性极弱甚至消失，如胡椒碱、秋水仙碱等。有的生物碱分子具有酚羟基或羧基，因而具酸碱两性，如槟榔次碱(arecaidine)和吗啡等。
4.溶解度 游离生物碱极性较小，不溶或难溶于水，能溶于氯仿、乙醚、苯、丙酮、乙醇等有机溶剂，也能溶于稀酸的水溶液而生成盐类。生物碱盐类易溶于水和乙醇，不溶或难溶于有机溶剂。此性质可用于生物碱的提取、分离和纯化。但也有不少例外，如麻黄碱、秋水仙碱均可溶于水，也溶于有机溶剂；小檗碱可溶于水，其盐在冷水中反而不溶；酚性生物碱可溶于氢氧化钠溶液；所有季铵盐生物碱由于能离子化，亲水性强，均能溶于水等。
5. 沉淀反应 大多数生物碱在酸性水溶液中，能与一些特殊的试剂(生物碱沉淀剂)作用，生成沉淀。利用这些沉淀反应，不但可以预试生物碱的存在与否，也可以用于生物碱的精制，或在提取过程中，用于指示提取是否完全。但直接用中药的酸水浸出液作生物碱沉淀反应，常不能得到准确的结果，因为水浸液中某些成分(如蛋白质、鞣质、胺类等)也能和生物碱沉淀剂产生沉淀，因此，必须将水浸液精制后再行试验。通常先选用3种以上不同的生物碱沉淀剂进行试验，若均为负反应，则肯定无生物碱存在；若呈正反应，则必须精制后再试验，第二次再呈正反应，才可确证存在生物碱。
常用的生物碱沉淀剂种类很多，通常是一些重金属盐类或分子量较大的复盐，以及特殊的无机酸或有机酸的溶液，常用的沉淀剂如下：
(1)碘化铋钾试剂(Dragendoff试剂，BiI3·KI)：在酸性溶液中与生物碱反应生成桔红色沉淀[Alk·KI·(BiI3)n，为一种络盐，Alk表示生物碱，下同]。此反应很灵敏。
(2)碘-碘化钾试剂(Wagner试剂，I2·KI)：在酸性溶液中与生物碱反应生成棕红色沉淀(Alk·HI·In)。
(3)碘化汞钾试剂(Mayer试剂，HgI2·KI)：在酸性溶液中与生物碱反应生成白色或黄白色沉淀[AlK·HI·(HgI2)n]。 (4)硅钨酸试剂(Bertrand试剂，SiO2·I2WO3)：在酸性溶液中与生物碱反应生成灰白色沉淀。
(5)磷钼酸试剂(Sonnenschein试剂，H3PO4·I2MoO3)：在中性或酸性溶液中与生物碱反应生成鲜黄色或棕黄色沉淀。此反应很灵敏。
(6)苦味酸试剂(Hager试剂)：在中性溶液中与生物碱生成淡黄色沉淀。
(7)氯化金试剂(HAuCl4试剂)：在酸性溶液中与生物碱反应生成黄色晶形沉淀。由于不同生物碱产生的结晶形状常不同，可用于鉴别。
6. 显色反应 生物碱能与某些试剂(显色剂)生成特殊的颜色，可供生物碱的识别。试验中，应对供试液进行纯化精制，纯度愈高，显色愈明显。显色剂的种类很多，除浓硫酸、浓硝酸、硫酸和重铬酸钾、浓盐酸或氯化铁外，大多数是由浓硫酸中加入少量其他化学试剂组成。常用的显色剂如下：
(1)矾酸铵-浓硫酸溶液(Mandelin试剂)：为1%矾酸铵的浓硫酸溶液。该试剂能与多数生物碱反应，呈现不同的颜色，如与阿托品、东莨宕碱显红色，与马钱子碱显血红色，与士的宁显紫色，与奎宁显淡橙色，与吗啡显棕色，与可待因显蓝色。
(2)钼酸铵(钠)-浓硫酸溶液(Frobde 试剂)：为1%钼酸铵或钼酸钠的浓硫酸溶液。该试剂能与可待因显黄色，与小檗碱显棕绿色，与乌头碱显黄棕色，与阿托品及士的宁不显色。在使用时应注意，该试剂与蛋白质也能显色。
(3)甲醛-浓硫酸试剂(Marquis试剂)：为30%甲醛溶液0.2ml与浓硫酸10ml的混合液。该试剂能与可待因显蓝色，与吗啡显紫红色，与咖啡碱不显色。
(4)浓硫酸：该试剂能与乌头碱显紫色，与小檗碱显绿色，与阿托品不显色。
(5)浓硝酸：该试剂能与小檗碱显棕红色，与秋水仙碱显蓝色，与乌头碱显红棕色，与咖啡碱不显色。
(三)含量测定：
一、非水碱量法
生物碱在水中碱性较弱，不能顺利地进行中和滴定（滴定突跃不明显，难以判断滴定终点）。在酸性非水介质中（如gHAc中），则能显示出较强的碱性，滴定突跃增大，可以顺利地进行中和滴定。
供试品：以消耗标准液8ml计算。溶剂：gHAc，一般用量10~30ml，滴定剂：0.1mol/L
HClO4/无水gHAc溶液，指示剂：结晶紫
适用范围
Kb﹤10-8的有机碱盐。
Kb为10-8到10-10选冰醋酸作溶剂 Kb为10-10到10-12选冰醋酸和醋酐作溶剂
Kb<10-12选醋酐作溶剂
二、提取中和法
1．基本原理
利用生物碱盐类可溶于水,游离生物碱不溶于水而溶于有机溶剂的性质进行提取，然后进行滴定的方法。
2．讨论
(1) 碱化试剂
① 常用的碱化试剂 NaOH、NH3、Na2CO3、NaHCO3、Ca(OH)2、MgO等。
② 对碱化试剂的要求 碱化试剂碱性大于生物碱的碱性，即碱化试剂的pKb＜生物的pKb
③ 选用碱化试剂时应考虑的因素
ⅰ．生物碱的化学性质：易水解或具两性，不能用强碱性碱化试剂。阿托品具有酯结构，与强碱接触时分解；吗啡具有酚羟基，和NaOH形成酚盐溶于水，难以用有机溶剂提取。
ⅱ．脂肪性物质的共存：有脂肪性物质共存时，不能用强碱性的碱化试剂，以免形成乳化而难以用有机溶剂提取。
④ NH3优点：氨水是最常用的碱化试剂。 氨Kb值：1.75×10-5 一般生物碱Kb：10-6~10-9 氨碱性适当，能使大部分生物碱游离，又不能使具酯结构或两性生物碱水解或成盐。
(2) 提取溶剂
提取溶剂要求 ⅰ．不与水相混溶 ⅱ．沸点低，容易挥散除去 ⅲ．对所提取生物碱有极大的溶解度，而对其它共存物质不溶或极少溶解 ⅳ．与碱化试剂或生物碱不起任何化学反应。 常用的提取溶剂：氯仿、乙醚，有时也使用混合溶剂
3．主要条件
最主要条件是水相的pH。 要求：能使有机碱全部以盐的形式存在，酸性染料能够解离成离子，以便它们定量地结合成离子对而转溶于有机相，且又能将剩余的染料完全保留在水相。
四、凯氏定氮法
1、原理
含氮供试品与浓硫酸共热，供试品中所含氮转变成氨，并与硫酸结合为硫酸氢铵和硫酸铵，用氢氧化钠碱化后，释出氨，随水蒸气馏出，用硼酸溶液或定量的酸吸收后，用标准酸液或标准碱液滴定，用空白试验校正。 凯氏定氮法分为3个步骤。
(1)．消解
在凯氏烧瓶中进行。将样品、Con.H2SO4、K2SO4、CuSO4放入凯氏烧瓶中一起加热，有机含N化合物中的N全部转变成NH3并以铵盐的形式固定－(NH4)2SO4、NH4HSO4。
(2)．蒸馏与吸收
用40%的NaOH溶液水蒸气蒸馏
(NH4)2SO4+2NaOHNa2SO4+2NH3+2H2O
NH4HSO4+NaOHNaHSO4+NH3+H2O
(3)．测定
① 直接滴定法
吸收液：用2%硼酸溶液
滴定液：0.005mol/L H2SO4液
每1ml的0.005mol/L H2SO4液0.1401mg的N
指示剂：甲基红-溴甲酚绿混合指示剂
终点颜色：灰紫色
NH3+H3BO3NH3.H3BO3
2NH3.H3BO3+H2SO4(NH4)2SO4+2H3BO3
② 剩余滴定法
用标准盐酸或硫酸作吸收液。
将蒸馏出来的NH3吸收于定过量的标准酸溶液中，过量的酸用标准碱溶液滴定。
五．高效液相色谱法：
1．特点：80~90%反相色谱分离，最常用十八烷基硅烷键合硅胶（ODS）。硅胶表面仅有25~50%硅醇基可与硅烷化试剂作用，在分离极性化合物特别是碱性药物和生物碱时，裸露的硅醇基和碱性药物发生吸附或离子交换作用，而使色谱峰拖尾，保留时间过长，甚至长期保留在色谱柱上。
2．三种主要方法：（1）加扫尾剂法：以十八烷基硅烷（ODS）键合的硅胶为固定相，在流动相中加入扫尾剂，以抑制或掩蔽固定相表面的游离硅醇基的活性。最常用的扫尾剂是三乙胺（TEA）。（2）用硅胶作固定相法：在不改性的普通硅胶柱上，利用碱性成分与硅醇基相互作用，以高浓度极性有机溶剂，碱性水相缓冲液为流动相分离碱性药物。（3）用金刚烷基硅烷化硅胶作固定相法：这种固定相表面被一根根短的烃链（乙基）连着的烃球（金刚烷）将硅胶表面上未反应的硅醇基全部覆盖，使其不能与极性物质作用。
发布评论